HPLC
En bref : La HPLC (chromatographie liquide haute performance) sépare les composants d'un échantillon pompé sous haute pression à travers une colonne. Elle sert à mesurer la pureté d'un peptide.
La méthode employée figure sur le certificat de chaque laboratoire. Pour les lots de FrancePeps, APIGENEX s.r.o. mesure par HPLC/UPLC, tandis que Liquilabs s.r.o. procède à un criblage peptidique avec identification par temps de rétention et spectre. C'est pourquoi la méthode est indiquée laboratoire par laboratoire, et non de manière globale.
La HPLC indique à quel point l'échantillon est propre, pas s'il s'agit de la bonne substance. Cette seconde question relève de la spectrométrie de masse, qui mesure la masse de la molécule. Seules les deux méthodes réunies permettent une conclusion solide.
Un pourcentage n'a de sens qu'avec sa méthode. Deux laboratoires peuvent analyser le même lot et obtenir des chiffres différents s'ils utilisent d'autres colonnes, gradients ou longueurs d'onde de détection. La méthode doit donc apparaître sur le rapport, et la bibliothèque des certificats la précise pour chaque laboratoire.
Le résultat s'obtient en rapportant la surface du pic principal à la surface totale des pics. Tout ce que la colonne ne fait pas apparaître sous forme de pic, comme l'eau, les sels ou le contre-ion, n'entre pas dans ce calcul. Voilà pourquoi la teneur en peptide et la pureté HPLC sont deux chiffres distincts, qui peuvent être exacts l'un et l'autre.
Après la synthèse, la même technique est utilisée à plus grande échelle pour purifier le peptide : on parle alors de HPLC préparative. Le but n'est plus de mesurer, mais de recueillir la fraction propre.
Termes associés
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